【熱點(diǎn)應(yīng)用】Zetasizer精準(zhǔn)表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度

本文由馬爾文帕納科醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用專家供稿

慢病毒載體（Lentiviral vector, LV）是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng)，可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達(dá)到良好的的基因治療效果。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞， 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等，使用慢病毒載體，能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加，能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達(dá)。

所以，在體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究中慢病毒載體（LV）與腺病毒（Ad）和腺相關(guān)病毒（AAV）同為主流的病毒載體系統(tǒng)。其顆粒粒徑約為90-120nm。

在慢病毒載體（LV）的生產(chǎn)工藝中，有無團(tuán)聚體 （aggregate），以及載體滴度（titer）的高低是重點(diǎn)考察的關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQAs）。Zetasizer Ultra納米粒度儀通過對(duì)LV顆粒的粒徑及載體滴度的表征，快速實(shí)現(xiàn)CQAs的測量。

Zetasizer Ultra 納米粒度電位儀

使用Zetasizer Ultra-Red以及小體積石英比色皿（ZEN2112）進(jìn)行相應(yīng)的粒徑和滴度測定。樣品測試體積為20µL，LV折射率、吸收率分別設(shè)置為1.45和0.001。

通過多角度動(dòng)態(tài)光散射（multi-angle DLS, MADLS）技術(shù)，我們對(duì)LV粒度大小及分布進(jìn)行表征（圖1） 。圖中有兩個(gè)粒徑分布峰，分別位于106.4以及430.6nm，這說明體系中除了LV單體，還有團(tuán)聚體產(chǎn)生。

圖1 LV樣品的光強(qiáng)粒徑分布圖

圖2 LV樣品的載體滴度

此外，除了基于MADLS技術(shù)得到的顆粒的準(zhǔn)確粒徑分布圖，我們還得到對(duì)應(yīng)尺寸的載體滴度信息（圖2）。可以看到LV單體的顆粒濃度約1x10¹²個(gè)顆粒/mL，團(tuán)聚體顆粒濃度約為1x10¹⁰個(gè)顆粒/mL，僅為單體的1%。單體和聚集體濃度相差較大的情況下，Zetasizer仍可很好的區(qū)分單體和聚集體。

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