【LNP/AAV】藥物載體的生物物理表征方法

更新時間：2022-09-14 點擊次數(shù)：2051

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【LNP/AAV】脂質(zhì)載體的生物物理表征方法

利用光散射和量熱技術(shù)對用于疫苗和治療的病毒和脂質(zhì)載體進行生物物理表征

作者：Natalia Markova, Stefan Cairns, Hanna Jankevics-Jones, Michael Kaszuba, Fanny Caputo and Jérémie Parot

近期，馬爾文帕納科應用科學家和挪威SINTEF工業(yè)生物技術(shù)和納米醫(yī)學部的科學家們在Vaccines雜志上發(fā)表一篇名為《利用光散射和量熱技術(shù)對用于疫苗和治療的病毒和脂質(zhì)體進行生物物理表征》的文章。

文章對多種用于新型疫苗研發(fā)制造的病毒或非病毒載體的表征方法做了專業(yè)的介紹。文中所述多種無標記生物物理技術(shù)作為互補的分析工具可廣泛用于AAV 和LNP的設計、表征和質(zhì)量控制。且已經(jīng)成功的用于表征AAV和LNP等藥物載體的物理、化學屬性，本文將對該項研究做簡要介紹。

原文：Vaccines 2022, 10, 49

引言

病毒載體和脂質(zhì)納米顆粒（LNP）的結(jié)構(gòu)復雜性影響其功能和藥物配方的成功性。這類分子被用作核酸（mRNA，DNA）的遞送平臺后，如何準確表征這些顆粒變得越來越重要。

在設計、產(chǎn)品開發(fā)和過程控制中，理化屬性的表征和質(zhì)量控制需要選擇合適、互相補充的分析工具。選擇合適的技術(shù)來監(jiān)測樣品需要考慮載體的性質(zhì)、測量處于產(chǎn)品開發(fā)的哪個階段、以及測量的目的。可靠的測量結(jié)果和對數(shù)據(jù)的充分解析依賴深厚的方法學專業(yè)知識和全面的數(shù)據(jù)分析方法。

這里，我們將介紹如何通過綜合使用互相補充的、非標記生物物理技術(shù)，包括動態(tài)光散射（DLS）、多角度光散射（MADLS）、電泳光散射（ELS）、納米顆粒跟蹤分析（NTA）、多檢測器SEC和差示掃描量熱法（DSC），表征包裹mRNA的病毒載體和LNPs的理化屬性。

樣品

使用病毒和非病毒載體樣品，包括包裹mRNA的脂質(zhì)納米顆粒（mRNA-LNPs），脂質(zhì)體和腺相關(guān)病毒（AAV）。

測量內(nèi)容與檢測技術(shù)

Zetasizer Ultra

Zetasizer Ultra 納米粒度及電位分析儀

Zetasizer Ultra 是快速而準確地測量顆粒和分子大小、顆粒電荷以及顆粒濃度的伴侶，其擁有用于高分辨率粒度測量切角度無關(guān)的多角度動態(tài)光散射（MADLS）技術(shù)可以更深入地展現(xiàn)樣品的顆粒分布，電泳光散射（ELS）技術(shù)可用于測量顆粒和分子的Zeta電位，以顯示樣品的穩(wěn)定性和/或團聚傾向性。可以用于rAAV 顆粒的粒徑及衣殼滴度的表征。

NanoSight NS300

Nanosight NS300 納米顆粒跟蹤分析儀

采用納米粒子跟蹤分析 (NTA) 技術(shù)，馬爾文帕納科NanoSight 這種技術(shù)利用光散射和布朗運動的特性，獲得納米顆粒大小 0.01 - 1µm及顆粒濃度，以及實時表征蛋白質(zhì)聚合(聚集)的解決方案。這使得 NTA成為病毒疫苗研究、納米毒物學和生物標志物檢測以及疾病狀態(tài)研究的細胞外囊泡、外泌體表征的重要技術(shù)。